本文目錄一覽表：

• 一、柱層析的基本操作過程
• 二、硅膠柱層析的操作技術
• 三、陰離子交換樹脂AG1-X8怎么裝柱阿，裝完怎么用，我用來純化植酸
• 四、請問做柱層析的硅膠怎么做預處理啊，怎么裝柱

一、柱層析的基本操作過程

柱層析的基本操作過程：主要包括常壓分離、減壓分離和加壓分離 3種模式。

常壓分離是最簡單的分離模式方便、簡單 ,但是洗脫時間長。減壓分離盡管能節(jié)省填料的使用量 ，但是由于大量的空氣通過填料會使溶劑揮發(fā) ，并且有時在柱子外面會有水汽凝結 ，以及有些易分解的化合物也難以得到 ，而且還必須同時使用水泵或真空泵抽氣。

加壓分離可以加快淋洗劑的流動速度 ，縮短樣品的洗脫時間，是一種比較好的方法 ，與常壓柱類似 ，只不過外加壓力使淋洗液更快洗脫。壓力的提供可以是壓縮空氣 ，雙連球或者小氣泵等。

柱層析技術也稱柱色譜技術。一根柱子里先填充不溶性基質形成固定相，將混合樣品加到柱子上后用特別的溶劑洗脫，溶劑組成流動相。

在樣品從柱子上洗脫下來的過程中，根據混合物中各組分在固定向和流動相中的分配系數不同經過多次反復分配，將不同組分逐一分離。根據填充基質和樣品分配交換原理不同，離子交換層析，凝膠過濾層析和親和層析是三種分離混合物的經典層析技術。

二、硅膠柱層析的操作技術

硅膠柱層析的原理

利用吸附原理，即利用硅膠對中藥混合物中各種成分吸附能力的差異，而使混合物中各成分得以分離的色譜方法。

硅膠柱層析的操作方法及注意事項 ：

裝柱

操作要點：裝柱前柱底要墊一層脫脂棉以防吸附劑外漏。 有干法裝柱和濕法裝柱兩種方法

（1）干法裝柱：將硅膠通過漏斗裝入柱內，中間不應間斷，形成一細流慢慢加入管內。也可用橡皮槌輕輕敲打柱硅膠柱使硅膠裝填連續(xù)均勻、緊密。柱裝好后，打開下端活塞，然后倒入洗脫劑洗脫以排盡柱內空氣，并保持一定液面。

（2）濕法裝柱：將最初準備使用的洗脫劑裝入柱內，打開下端活塞，使洗脫劑緩慢流出。然后把硅膠慢慢連續(xù)不斷地倒入柱內（或將硅膠與適量洗脫劑調成混懸液慢慢加入柱內，），硅膠依靠重力和洗脫劑的帶動，在柱內自由沉降，此間要不斷把流出的洗脫劑加回柱內保持一定的液面，直至把硅膠加完并在柱內沉降不再變動為止。然后在硅膠上面加一小片濾紙或少許脫脂棉。根據加樣量控制洗脫劑液面至一定高度。

（3）勻漿法： 攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。

上樣

將欲分離的樣品溶于少量裝柱時用的洗脫劑中，制成體積小、濃度高的樣品溶液，加入層析柱中硅膠面上。如樣品不溶于裝柱時用的洗脫劑，則將樣品溶于易揮發(fā)的溶劑中，并加入適量硅膠（不超過柱中硅膠全量的1/10）與其拌勻，除盡溶劑，將拌有樣品的硅膠均勻加到柱頂（始終保持洗脫劑有一定的液面），再覆蓋一層硅膠即可。

上樣時注意沿著柱內壁慢慢加入，始終保持硅膠上端表面平整；上樣量為硅膠的1/60~1/30。

洗脫

洗脫劑的選用可通過薄層色譜篩選，一般TLC展開時Rf 值為0.2~0.3的溶劑系統(tǒng)是最佳的洗脫系統(tǒng)，采用梯度洗脫法洗脫。

先打開柱下端活塞，保持洗脫劑流速1~2滴/秒。上端不斷添加洗脫劑（可用分液漏斗控制添加速度與下端流出速度相近）。如單一溶劑洗脫效果不好，可用混合溶劑洗（一般不超過三種溶劑），通常采用梯度洗脫。洗脫劑的洗脫能力由弱到強逐步遞增。

收集處理

等份收集洗脫液，每份收集量大概與所用硅膠的量相當。每份洗脫液采用薄層定性檢查，合并含相同成分的洗脫液。經濃縮、重結晶處理往往可得到某一單體成分。如仍為幾個單體成分的混合物，不易析出單體成分的結晶。則需要進一步層析或用其他方法分離。

注：

(1)柱色譜分離能力比薄層分離能力強，效果更好，尤其對結構相似、性質接近、采用薄層難以分離的成分分離效果好。

(2) 洗柱子能不用含水的混合溶劑，就盡量不要用。



三、陰離子交換樹脂AG1-X8怎么裝柱阿，裝完怎么用，我用來純化植酸

層析柱大小有什么要求嗎，我這個國標用的是0.8x10cm，應該很難操作吧

追答

都是一樣的，只要不進氣泡就好。

四、請問做柱層析的硅膠怎么做預處理啊，怎么裝柱

分類: 教育/科學 科學技術
問題描述:

我是做天然產物分離實驗的

解析:

硅膠的預處理

我們以濃鹽酸浸泡硅膠14小時，然后用蒸餾水洗滌硅膠4次后，將起進行減壓抽濾，后不斷加蒸餾水沖洗。在1小時之后，抽濾的水呈中性，但仍然含有氯離子。經過4小時不斷的沖洗才使得抽濾液中基本不含氯離子。晾干一周后，在110℃烘箱中活化2小時。

活化后的硅膠加石油醚浸泡并攪拌均勻。在裝柱時，宜使用口徑較大的玻璃漏斗置于 層析柱上部，注入1/2高的石油醚，打開下部活塞，然后盡量均勻地將硅膠傾入漏斗，這樣可以防止層析柱中形成斷層(這一步是實驗的關鍵步驟)。

裝柱

裝柱子（添硅膠）時，有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。

濕法裝柱是先把硅膠用適當的溶劑拌勻后，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗劑 走柱子 ，本法最大的優(yōu)點是一般柱子裝的比較結實，沒有氣泡。

干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側，至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結實。接著是用淋洗劑 走柱子 ，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但最大的缺陷在于 走柱子 時，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺到），容易產生氣泡，這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙醚，二氯甲烷更為明顯。雖然產生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時候，氣泡就會釋放出來，嚴重時，整個柱子變花，樣品不可能平整地通過，當然也就談不上分離了。解決的辦法是：第一、硅膠一定要天結實；第二、 一定要用較多的溶劑 走柱子 ，一定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復到室溫后再撤去壓力。

也有介紹在硅膠的最上層填上一小層石英砂，防止添加溶劑的時候，使得樣品層不再整齊。但我的感覺是如果小心上樣，添加溶劑，則沒有這個必要。

上樣也有干法和濕法之分：干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑（最好就是展開劑，如果展開劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉移得到的溶液，沿著層析柱內壁均勻加入。然后用少量 薌 洗滌后，再加入。濕法較方便，熟手一般采用此法

以上文章是對層析柱裝柱流程-手動層析柱裝柱流程問題和相關問題的解答，層析柱裝柱流程-手動層析柱裝柱流程的問題希望對您有用！層析柱裝柱流程-手動層析柱裝柱流程建議選擇啟派智能廠家，啟派智能是一家創(chuàng)新型智能裝備企業(yè)，它生產的層析柱裝柱流程-手動層析柱裝柱流程能夠為用戶提供合理化的解決方案。